1. 连接酶检测反应(LDR)分型方法  

      技术原理：主要应用连接酶检测反应 (ligase detection reaction，LDR)技术。即在Taq DNA连接酶的作用下，当左右两条寡核苷酸探针与目的DNA序列**互补，并且两条探针之间没有空隙时才能发生连接反应，否则连接反应不能进行，*后通过荧光扫描片段长度，实现对SNP 位点的检测。  

  原理及实验流程示意图：  

  2. 多重SNaPshot SNP分型方法  

      技术原理：SNaPshot SNP分型是一种以单碱基延伸原理为基础，同时利用多重PCR对多个已知SNP 位点进行遗传分型的方法。在一个含有测序酶，四种荧光标记的ddNTP，紧挨多态位点5’端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中，引物延伸一个碱基即终止，经ABI 3730 测序仪跑胶后，根据峰的颜色可知掺入的碱基种类，从而确定该样本的基因型，根据峰移动的胶位置确定该延伸产物对应的SNP位点。  

  原理及实验流程示意图：  

  3. MassArray SNP分型方法  

      技术原理：  Sequenom MassArray系统主要是利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOF MS) 进行分析，即PCR扩增产物或者预处理样本在延伸单碱基后，将制备的样品分析物与芯片基质共结晶，将该晶体放入质谱仪的真空管，而后用瞬时纳秒 (10-9s) 强激光激发，由于基质分子经辐射吸收能量，导致能量蓄积并迅速产热，从而使基质晶体升华，核酸分子就会解吸附并转变为亚稳态离子，产生的离子多为单电荷离子，这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能，进而在一非电场漂移区内按照其质荷比率得以分离，在真空小管中飞行到达检测器。  

  原理及实验流程示意图：  

  4.直接测序法  

  技术原理：将待检测片段进行PCR扩增并直接测序是SNP检测方法中较准确的方法。纯合位点为单峰，而杂合峰为套峰，因而很容易将几种基因型区分开来。直接测序法不仅可用于对已知位点的检测，还可用于发现未知的SNP位点。  

 
 实验结果图：  

  客户提供
   1、SNP位点信息：
     人类基因组需SNP位点的rs号；其它物种如牛、鸡、鱼等无rs号的，需SNP位点上下游各200bp的确切序列，SNP位点的突变类型，以及位点的上下游25bp内是否存在其它位点。
   2、分型样品：
     （1）若分型样品为基因组DNA或质粒DNA ，样品要求：DNA浓度≥20ng/ul，体积>10ul，位点较多的按照1ul/位点计算。纯度 OD 260/OD280 在1.7～1.9之间。由于样品质量差异过大导致的成功率下降，由客户负责。如果要求提供样品纯化服务，我们对每个样品将收取纯化费。
     （2）若分型样品为血样，样本要求：血液样品，体积大于500ul，需用抗凝剂抗凝，送样过程中请注意保持低温，防止DNA降解；血斑样品，9-25mm2大小的血斑两个以上。对每个血样或血斑样本将收取DNA提取费。
     （3）客户在寄送样品的时候，应在送样包裹中放置足量的冰袋，以减少在运输过程中因温度变化导致DNA降解的可能。请在每次寄出样品后及时与本公司分型部联系，可以E-mail 或者传真的方式告知样品的详细信息，以便收到样品后能及时与您进行联系确认。  

  客户将得到结果 
 ★ SNPs结果（Excel表格）
 ★ 原始SNP峰型图
 ★ 完整实验报告包括扩增和反应的体系，所涉及的引物、探针序列等